PCR自年由美国加利福尼亚的Cetus公司的Mullis博士发明到现在,标志着检测技术进入了分子诊断时代。PCR检测快速、灵敏,以至于有人认为检测方法已经到达巅峰。虽然PCR检测灵敏度和特异性比较好,但存在一定的局限性:病原体DNA在细胞核内,如提取不够,容易造成假阴性,导致漏诊;PCR技术最终的扩增产物为DNA,因为环境中DNA很稳定,扩增引起的污染不容易消除,容易引起假阳性结果,导致患者误诊进而引发错误治疗和抗生素滥用;即使病人得到了有效的治疗,病原体死亡后DNA仍然能够稳定存在至少3周时间,检测结果无法及时反应治愈结果,不利于临床获取有价值的诊断信息,从而导致错误治疗和抗生素过度使用。而RNA由于在病原体内大量存在,特别是16SrRNA在每个病原体中存在达到-个,从而提高病原体的检出效率。
随着科技的发展,RNA恒温扩增技术势必将引领新一代的核酸扩增检测技术,以其灵敏度高、特异性好、无创等优势开启了检测技术的新时代。这一创新技术也可广泛应用到疾病防控、临床检验和食品安全检测等多个领域。
RNA检测技术是目前较为先进的分子诊断技术,已经在很多领域大显身手。生物梅里埃公司、基因探针公司是RNA诊断领域的佼佼者。美国有多种分子诊断产品,而中国不超过50个。目前国外分子诊断占整个诊断市场的11%,中国不到1%,这意味着RNA检测在中国具有很大的发展空间。
目前,在我国主要应用的RNA检测是SAT检测技术,SAT是英文SimutaneousAmplificationTesting的缩写,称为实时荧光RNA恒温扩增检测技术。其原理:靶标RNA在M-MLV逆转录酶的作用下逆转录合成一条带T7启动子的双链DNA,T7RNA聚合酶以这条双链DNA为模板不断地合成RNA,合成出的RNA与分子信标结合,发出荧光,可以被荧光检测仪检测到,新合成的RNA经过逆转录过程又可以合成双链DNA,如此往复,最终达到扩增的目的。
RNA检测在我国临床实验室主要是用于感染性疾病病原体的检测,其主要原因是这些病原体如沙眼衣原体、淋球菌、结核分枝杆菌、肺炎支原体、肠道病*、乙型肝炎病*、丙型肝炎病*等,如采用以前的培养、免疫学方法测定特异抗原抗体进行临床检测,或因为病原体难以培养,如上述病*、细菌、衣原体和支原体的检测等,或者检测的灵敏度不够,如乙型肝炎、丙型肝炎病*和人免疫缺陷病*等的抗原抗体检测,而难以开展临床检测。RNA检测因其极高的检测灵敏度和特异性,使得血液、痰、尿液、粪便等临床标本中的极微量的难培养病原体的检测变得迅捷而又准确,甚至已成为目前大多数病*、衣原体和支原体临床检测的首选方法。
究竟什么样的病原体要开展分子诊断呢?
通过可靠、准确的RNA扩增检测技术,必将给您提供有力的临床诊断依据。
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