细胞培养，是生物学实验中很重要的一部分，细胞养不好，分分钟影响你的实验结果，可能这一周的实验都白费；当然除了每天小心伺候，还要对它的生长习性了如指掌。
细胞类型：主要分为原代细胞（从组织取出后立即培养的细胞；一般传代时间比较短）和传代细胞（经过处理的可以持续保种传代的细胞）。
实验室的细胞：主要是自己培养的原代细胞和从专业机构（中国科学院细胞库；北纳生物买过）买的传代细胞。
细胞培养（cellculture）技术：是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等生物学功能。
生长特性的查询：可以根据购买网站以及相关文献查看正常情况下，显微镜下细胞的生长形态，方便后期实验过程中判断细胞的培养状态；提前查看细胞正常生长所需要的培养基，很多培养基都需要自行配置，相关试剂需要提前购买；查看细胞的培养条件，保证细胞的良好状态，方便后续实验。
培养基的配置：一般情况下比较常用的培养基有PRMI、DMEM、MEM基础培养基；但在正常细胞的培养过程中，还需要在基础培养基中加入其他的营养成分来保证细胞的生长状态，如胎牛血清（FBS；提供细胞生长所需的生长因子、激素、各种蛋白、促进贴壁和铺展的因子等其他多种不明营养物质），马血清（提供一些别的血清中没有的生长因子；本实验室在培养免疫细胞时会添加），谷氨酰胺（可以促进各种氨基酸进入细胞膜，合成核酸和蛋白质），细胞因子（个别细胞生长要求的特殊成分）等。根据生长要求按照一定的比例于超净工作台中加入到基础培养基，标记后4℃保存。
注意：由于血清存在的不稳定性，细胞培养过程中需要定期检测是否存在支原体污染。
细胞的复苏：液氮取出细胞后立即放入37℃水浴锅，并轻轻摇晃，使细胞冻存液尽快融化（DMSO浸润的细胞比较脆弱，细胞融化过程中的冰晶伤害细胞），融化后转移至15mL离心管中重悬（根据细胞每管冻存数量，也可选择2mLEP管），r离心5min，弃上清，加1mL培养基重悬，多次吹吸防止细胞结团（注意轻柔，防止细胞破碎），台盼蓝计数，判断细胞实际存活状态（活细胞率；结团率），接入新的培养瓶中培养。注意：新复苏的细胞需要传代2-3次后，细胞状态比较好之后才可用于实验。
细胞的传代与种板：根据细胞的生长时间，等培养瓶底部铺满80%的细胞时，可以考虑传代，主要是因为大部分细胞在培养瓶中生长时，会存在接触抑制，即到达一定的密度时会存在停止生长的状态，因此，实际培养中，我们需要保证细胞的生长空间是足够的，同时及时更换培养基保证细胞生长的营养供给和PH平衡。显微镜下观察，取生长状态良好的细胞，倒掉旧培养基，1mL0.25%的胰酶润洗，3mL胰酶消化，根据细胞的消化难易，调整消化时间（一般为2-5min）,防止过度消化（会影响细胞状态），6mL培养基终止消化，移液管吸取细胞悬液，r离心5min，弃上清，加1mL培养基重悬，多次吹吸防止细胞结团（注意轻柔，防止细胞破碎），台盼蓝计数，判断细胞实际存活状态（活细胞率；结团率），根据实验需求选择合适的细胞培养板，剩余的细胞悬液加入到新的培养瓶中继续培养即为传代。注意：细胞在培养瓶中生长时，有的细胞还存在密度依赖；种板密度主要取决于细胞的生长特性，根据实验可适当调整，如同样的96孔板测细胞增殖，有做过GES-1种板个/孔，也做过Jurkat种板个/孔。
细胞冻存：在培养细胞的过程中，一般复苏的细胞都是代数比较早的细胞，即使是永生化的传代细胞，长期传代也是会影响实验结果的，因此在发现细胞状态比较好的时候，应尽可能多的保种冻存，防止细胞出现你想象不到的意外，另外，读研就相当于半工作，尽量不要把希望和实验寄托于师兄师姐的身上（过来人的忠告）。
显微镜下观察，取生长状态，背景干净，形态良好的细胞进行保种，倒掉旧培养基，1mL0.25%的胰酶润洗，3mL0.25%的胰酶消化，根据细胞的消化难易，调整消化时间（一般为2-5min）,防止过度消化（会影响细胞状态），6mL培养基终止消化，移液管吸取细胞悬液，r离心5min，弃上清，根据细胞量加入相应的细胞保种液（本实验室T的培养瓶加入10mL保种液），移液管重悬，分装于无菌冻存管中，放入冻存盒，-20℃过夜，后转移保存至-80℃冰箱或液氮罐中。
保种液的配置：用过三种比例，9倍的血清+1倍的DMSO最常用也最方便；也用过7倍的血清+2倍的培养基+1倍的DMSO；文献中还有5倍的血清+4倍的培养基+1倍的DMSO。
细胞实验注意事项：
1、注意无菌操作，防止污染，耽误实验进程。
2、操作过程中注意枪头或移液管尽量不要碰到管壁。
3、种板之后“十”字形摇晃，防止细胞聚集到一块，影响实验结果。
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